Материалы и методы исследования

Наиболее удобным тест-объектом генетической индикации водной среды являются рыбы как типичные гидробионты, присутствующие повсеместно в наших водоемах. Тест-системой для проведения эколого-генетического мониторинга является микроядерный тест, предусматривающий учет количества микроядер (мутаций) в клетках рыб. Данный тест объективно характеризует частоту хромосомных нарушений в ходе митоза, а именно: разрывы хромосом, отставание отдельных хромосом в ходе деления клеток. Подходящими клетками для анализа являются эритроциты крови, которые у рыб имеют достаточно крупные размеры и обладают ядром. Таким образом, рыбы могут играть роль модельных объектов при определении потенциально опасных для человека генотоксичныих веществ в воде (Журков, Фельдт, 1989).

В ходе практики в водоёмах находящихся вблизи биостанции Ажендарово был проведён отлов экземпляров серебряного карася. Непосредственно после отлова у каждого экземпляра были отобраны образцы цельной крови из сосудов хвостового стебля. Каплю крови немедленно помещали на чистое, обезжиренное предметное стекло с последующим приготовлением мазка. После высыхания на воздухе зашифрованный препарат фиксировали в этаноле в течение 30 мин. Известно, что для оценки качества среды могут быть использованы разные подходы (Гольдберг, 1937). Помимо прямого определения содержания и концентраций различных химических и радиационных загрязнителей среды, особое значение отводится системе биологической индикации, главным компонентом которой является эколого-генетический мониторинг, позволяющий в наиболее полной мере оценивать качество экологических параметров конкретной среды. Микроядра в микроскопе видны как небольшие округлые, без острых углов, но с чётким контуром, густо окрашенные тельца, реже - замкнутые или разорванные кольца. «Истинное» микроядро должно быть видно в эритроците, обычно ближе к периферии и находиться в фокусе, когда чётко виден контур эритроцита. (Кассирский, Алексеев, 1970). При смещении объектива микроскопа «истинные» микроядра не должны сдвигаться относительно контура эритроцита. Если в поле зрения между эритроцитами много осажденных гранул красителя, то такой препарат нельзя использовать для микроядерного анализа. Окрашивание препаратов проводили в течение 15 мин. 5% раствором красителя Гимза (Merk), приготовленного на фосфатном буфере pH - 6,8. Окрашенные препараты промывали дистиллированной водой и сушили на воздухе. Цитогенетический анализ проводили под световым микроскопом Nikon eclipse - E200 с использованием увеличения х 1000. От каждого экземпляра анализировали по 1000 полихроматофильных эритроцитов. Оценку достоверности различий по изучаемым цитогенетическим параметрам проводили непараметрическим методом с использованием критерия Манна-Уитни

Рисунок 2. Микрофотография препарата цельной крови Серебряного карася (х 400)

Рисунок 3. Микроядро в эритроците Серебряного карася (х 1000)

Еще статьи по экологии

Оценка негативного влияния работы шахты на природу
Бурное развитие промышленности во всех странах мира поставило перед человечеством острую проблему - охраны окружающей природной среды, с целью сохранения экологических систем, исторически сформировавш ...

Основные вопросы экологии
С момента появления человека познание природы было одним из необходимых условий его выживания. Человечество постепенно накапливало экологические знания. Известно, что все живые организмы тес ...

Система очистки сточных вод на ОАО Завод Универсал
Экологическая обстановка в Новокузнецке является одной из самых сложных. Город стабильно входит в двадцатку экологически неблагополучных городов России. Здесь среднегодовые концентрации вре ...